基于转录组学和蛋白质组学的高海拔冠状动脉高压大鼠模型的新靶点

食管高灌注（PH）是指静息时平均食管灌注≥25 mmHg。 它根据血震荡力讲授特征、确诊前提和生理讲授分为五类。 第三类高海拔食管高灌注（HAPH）是由于在高海拔高热生态之前肺通气量代偿性增加和肺髓质血管收缩引起的，导致高原地区心肌病。 临床腹泻包括运动性呼吸困难、头痛和疲劳。 HAPH 确实反映了未有适可不高海拔，并浸润不明确的生理生理前提。 大约有 1.4 亿人生活在海拔 2,500 米以上的东部，每年有高达 4,000 万人采访这些高海拔东部。 高热导致心脏RNA理解明人发生不同巨大变化； 这都从依然居住在高海拔东部的居民及其后代的RNA型适可不性巨大变化之前得知的。HAPH 的治疗法仍在数据量化之前。可不同意患者转回低海拔东部，碳疗直接。抑制剂治疗法的数据量化以外一些随机试验。 HAPH 的生理与其他类型的 PH 相似，因此很多人考虑对 PAH 直接的抑制剂究竟对 HAPH 直接。

然而，所有这些靶向抑制剂都在HAPH之前的直接性和前提尚不明确。为了解决这个缺陷，我们旨在数据量化高热所牵涉到的分子结构前提，可用啮齿类动物 HAPH 模型，并技术的发展综合多组讲授方法。 在此处理过程之前，我们旨在数据量化几种靶向抑制剂和复碳的作用，以确定高海拔引起的高热的潜在新治疗法靶标。 特别是，我们数据量化了靶向抑制剂如何严重影响心脏之间的不同RNA和RNA理解。

数据量化设计：

将啮齿类动物摆在 10% O2（高热）过道之前 3 周以产生 PH。解读啮齿类动物（C 组）在整个实验之前都处于常碳生态下，并在治疗法期间（即从第 21 天开始）用载体同步进行治疗法。 3周时，其余啮齿类动物随机分为时是；一组被处刑（第 21 天）以评量心肺功能性。其余 5 组用靶向抑制剂或复碳治疗法，从第 21 天到第 35 天处刑。慢性高热，载体处理（M）；慢性高热，司来帕格治疗法；慢性高热，奈斯替坦治疗法；慢性高热，riociguat 治疗法；慢性高热、复碳 (RE)。

激活组量化：

浓缩总 RNA，并通过可用 Arraystar rRNA Removal Kit 去除 rRNA 来可溶性 mRNA 和非UTF- RNA。 mRNA 和非UTF- RNA 被片段化缓冲液分解成电影段（~200-500 nt）。以电影段为模板，利用随机六聚体双肽键合成第一肽键cDNA。在第二肽键合成处理过程之前，dTTP 被 dUTP 取代。 然后投身洗脱缓冲液以通过末端修复和添加腺嘌呤来氢化和分离电影段。 电影段被氢化并与接头通往； 可用尿嘧啶-N-糖基化酶消化第二条肽键。 琼脂糖发射光明人后，选择有用的片段作为模板同步进行PCR扩增。 可用 Agilent 2100 脊椎动物量化仪和 ABI StepOnePlus 实时 PCR 具体来说电子束纳同步进行一原理和质量评量。 该文纳可用 Illumina HiSeq 2000 系统同步进行脱碳核糖核酸。

LC-MS/MS 量化

在通往到 Easy-nLC 1000 液相色明人系统的Q Exactive HF 质明人仪上量化电子束。将干燥的氨基酸电子束再度溶解在盐酸 A（0.1% 硝酸水溶液）之前并加载到捕获集柱之前可用盐酸 A 的最大灌注力为 280 bar，然后在自制的 150 μm × 30 cm 硅胶微柱上以 5–35% 的梯度同步进行分离震荡相 B（乙腈和 0.1% 硝酸），流速为 600 nl/min，持续 150 分钟。 QE HF 的 MS 量化是在 3e6 原子的自动增益控制目标下同步进行一次全扫描，然后同步进行多达 30 次与原始数据系统性的 MS/MS 扫描具有更高高能量的碰撞表征，在 Orbitrap 之前电子束到（R = 15,000 在 200 m/z）。

数据量化结果：

基于RNA-seq原始数据的共理解网络服务的功能性可溶性量化和枢纽站分子结构检验。

基于RNA原始数据的共理解网络服务的功能性可溶性量化和枢纽站分子结构检验。

RNA-seq 和RNA组讲授揭示了对三种抑制剂的反可不之间的强系统性性，具有几乎相同的敏感度。GO 可溶性显示不同理解的RNA包括参加葡萄糖调节、激活和翻译的RNA。

司来帕格、奈斯替坦和复碳可更佳 HAPH。Serpina1、Cryz 和 Cmc1 被检验出来，通过多组讲授筛选，作为参加HAPH的极为重要RNA。这些注意到为 HAPH 的靶向抑制剂前提提供者了更进一步见解。

数据量化结论：

Selexipag、macitentan 和复碳显着减弱了啮齿类动物 HAPH 模型，而 riociguat 的作用较弱。 不同理解的RNA参加葡萄糖调控、激活和翻译。 某些RNA受到 HAPH 和治疗法的严重影响。 我们可用多组讲授方法筛选了极为重要RNA Serpina1、Cryz 和 Cmc1。 这些注意到确实有助于更容易地了解高热所牵涉到的分子结构前提，并确实提供者更进一步治疗法靶标。

文献中有：

Xu X, Li H, Wei Q, Li X, Shen Y, Guo G, Chen Y, He K, Liu C. Novel Targets in a High-Altitude Pulmonary Hypertension Rat Model Based on RNA-seq and Proteomics. Front Med (Lausanne). 2021 Nov 3;8:742436. doi: 10.3389/fmed.2021.742436. PMID: 34805208; PMCID: PMC8595261.